LNCAP細(xì)胞培養(yǎng)小技巧

簡介:

細(xì)胞名稱：人前列腺癌細(xì)胞LNCaP clone FGC

培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S

生長狀態(tài)：貼壁生長

LNcapcloneFGC，人前列腺癌細(xì)胞，1977年從一名患有前列腺癌的50歲男性的左鎖骨上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中建立，該患者經(jīng)確診為前列腺癌轉(zhuǎn)移；文獻(xiàn)中描述細(xì)胞對雄激素敏感。

該細(xì)胞培養(yǎng)期間會遇到那些問題或者特殊需求呢？

1、生長速度緩慢。

2、培養(yǎng)一段時間發(fā)現(xiàn)聚團(tuán)了怎么辦？

3、使用的培養(yǎng)瓶是否需要特殊處理或者采用一些特殊的培養(yǎng)瓶呢？

想必這些是大家經(jīng)常遇到的問題吧，那么下面我們就為大家一一解答這些疑問，處理大家經(jīng)常遇到的問題吧。

該細(xì)胞自身生長速度是屬于比較緩慢的一種類型，具體倍增時間大約在60多個小時左右，這些是我們實驗人員難以干預(yù)的因素，另外該細(xì)胞在培養(yǎng)的時候會引起培養(yǎng)基ph值明顯變化，因此及時更換培養(yǎng)液是必須做的選擇之一。我們能做到的是處理該細(xì)胞的時候，注意提高相應(yīng)的凍存量（比如2個長滿的T25培養(yǎng)瓶凍存3株作為備用），此外凍存液也要稍微多300ul左右，提高存活率。另一點，根據(jù)該細(xì)胞的培養(yǎng)條件入手了，該細(xì)胞經(jīng)常使用的培養(yǎng)條件是：RPMI-1640（品牌：中喬新舟 貨號：ZQ-200）+10%FBS（品牌：中喬新舟 貨號: AU0600）+1%PS（貨號：CSP006）+1%L-alanyl-L-glutamine（品牌：中喬新舟  貨號：CSP004）+%SP（品牌：中喬新舟  貨號：CSP003），推薦*培養(yǎng)基（品牌：中喬新舟 貨號:ZQ-221）我們實驗室長期的培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，該細(xì)胞在20%的血清濃度下，生長速度相比較10%有所提升，且此方法也被一些大廠培養(yǎng)機構(gòu)所使用，對實驗時間有要求的小伙伴來說是比較好的一個方法。

如圖一所示可以看出細(xì)胞出現(xiàn)明顯聚團(tuán)嚴(yán)重的現(xiàn)象，遇到這樣情況我們該如何培養(yǎng)出圖二這么好看的細(xì)胞呢？

我們建議針對消化處理和培養(yǎng)器皿的選擇兩方面來優(yōu)化，接下來分享一下我們實驗室的一些小技巧，幫助大家更好的處理這個細(xì)胞。首先這株細(xì)胞并不形成一致的單層，而是形成集落，這也是此細(xì)胞為何總是出現(xiàn)這個現(xiàn)象的一個原因，因此我們才會想到從細(xì)胞消化及培養(yǎng)器皿的處理、選擇上去解決這個問題。

在消化處理的時候，我們選用的胰酶濃度是0.25%，棄去上清培養(yǎng)液后，在瓶內(nèi)添加1ml左右0.25%的胰酶，讓它覆蓋T25瓶底，迅速吸出丟棄，然后再添加1ml的胰酶，放入到培養(yǎng)箱中消化，此時每2min拿出細(xì)胞鏡下觀察，輕輕拍打瓶底如果多數(shù)細(xì)胞呈流沙狀，然后添加終止液，用巴氏管在瓶底輕輕吹打細(xì)胞懸液，目的是把細(xì)胞吹散，不要出現(xiàn)團(tuán)塊即可進(jìn)行下一步的傳代或者凍存等操作。

關(guān)于器皿的選擇，我們實驗室前期使用的是Corning的Cellbind培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，但后面經(jīng)過長期的對比培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)采用我公多聚賴氨酸包被液（貨號：0413）包被過的T25培養(yǎng)瓶培養(yǎng)的細(xì)胞，形態(tài)及狀態(tài)更佳，更不容易出現(xiàn)細(xì)胞聚團(tuán)的現(xiàn)象。

以上就是lncap細(xì)胞培養(yǎng)的一些小技巧，大家get到了嗎？

細(xì)胞復(fù)蘇注意事項

1、整個復(fù)蘇過程要盡量快，溶解時間太長可能影響復(fù)蘇效果；

2、已溶解的凍存細(xì)胞盡量短時間的在常溫存放，盡快稀釋或者離心去除DMSO；

3、由于“化冰"這一步里凍存管與水溫差太大，尤其是液氮里拿出來的凍存管，放到水里可能會造成翻江倒海的既視感，所以可以用鑷子夾住凍存管往水里摁，這樣即使有炸裂的情況也會有水做緩沖；

4、取凍存管時要謹(jǐn)防凍傷，尤其是夏天，盡管熱也最好穿長袖白大褂；

5、離心這一步也可以在凍存管里的冰融化后直接進(jìn)行，也就是直接把凍存管離心，離心后棄去原來的凍存液，然后直接加*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接著把細(xì)胞轉(zhuǎn)到培養(yǎng)皿/瓶里培養(yǎng)。這種方法也許不能將DMSO清除得很干凈，但是基本影響不大；

6、復(fù)蘇第二天記得去看看細(xì)胞，如果狀態(tài)還不錯的話就說明復(fù)蘇成功。